Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik Pada Serum

Table of Contents

Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik Pada Serum. Penentuan aktivitas asam fosfatase dalam serum hampir selalu diarahkan pada enzim prostat. Memang, direkomendasikan bahwa pengukuran penanda tumor seperti penentuan PSA (Prostatic Specific Antigen) dikombinasikan dengan kedua pemeriksaan klinis pasien. Aktivitas Prostatic Acid Phosphatase (P ACP) dalam serum kemudian memungkinkan konfirmasi dan evaluasi diagnosis positif karsinoma prostat. 

Prinsip Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik Pada Serum

Metode modifikasi Hillmann. Skema reaksi adalah sebagai berikut:

Tingkat di mana senyawa diazo terbentuk, diukur pada 405 nm, sebanding dengan aktivitas ACP dalam spesimen. Aktivitas NP ACP (Aktivitas ACP non prostat, tartrat resisten) diukur dengan adanya Tartrat. Perbedaan antara uji ACP dan salah satu dari NP ACP memberikan aktivitas P ACP. 

Komposisi Reagen Pemeriksaan Asam Fosfat

R1      ACID PHOSPHATASE                   Citrate Buffer

                                                                      Concentration in the test

Citrate buffer pH 5.4                                    150 mmol/L

1,5-Pentanediol                                             114 mmol/L

Surfaktan, pengawet

R2    ACID PHOSPHATASE                     Citrate/Tartrate Buffer

Na Tartrate                                                    75 mmol/L

Citrate buffer pH 5.4                                    150 mmol/L

1,5-Pentanediol                                             114 mmol/L

Surfactant, pengawet

R3       ACID PHOSPHATASE                 Substrate

alfa-naphtyl phosphate                                 12.5 mmol/L

Fast Red TR Salt                                           1.6 mmol/L

(diazo 2, chloro 5 toluene)

R4        ACID PHOSPHATASE                 Stabilizer

Acetic acid                                                    1.5 mol/L (in vial r4)

Persiapan Reagen Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik Pada Serum

• Vial R3: Gunakan instrumen yang tidak tajam untuk melepas tutupnya.
• Reagen ACP: Segera tambahkan isi vial R3 ke R1
• Reagen NP ACP: Segera tambahkan isi vial R3 ke R2
• Aduk perlahan dan tunggu hingga larut sempurna. 
• Botol R4 siap digunakan.

Stabilitas dan Penyimpanan

Disimpan jauh dari cahaya, tertutup rapat dalam botol asli pada 2-8 ° C, bila disimpan dan digunakan seperti yang dijelaskan, reagen stabil:

Belum dibuka:

• Sampai dengan tanggal kedaluwarsa yang tertera pada label kit.

Setelah dibuka:

• Reagen yang dilarutkan stabil selama 10 hari pada 2-8 ° C
• Buang reagen apa pun jika keruh atau jika reagen kosong pada 405 nm > 0,600

Pengumpulan dan Penanganan Sampel Pemeriksaan Asam Fosfat

Serum yang tidak mengalami hemolisis. Pisahkan dari bekuan sesegera mungkin setelah pengumpulan dan segera diperiksa.

Asamkan pada pH 5,4-6,2, tambahkan setetes (20 L) vial R4 (Penstabil) untuk 1 mL serum.

Aktivitasnya menurun 50% dalam 8 jam dalam serum yang tidak diasamkan.

Aktivitas asam fosfatase stabil dalam serum yang diasamkan untuk:

• 7 hari pada 2-8 ° C.

Prosedur Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik

Metode manual.

Diamkan semua reagen pada suhu kamar. 

Pipet ke dalam kuvet termostat panjang jalur 1 cm (37 ° C):	Uji 1 (ACP)	Uji 2 (NP ACP)
Reagen ACP (R1 + R3)	1 mL
Reagen NP ACP (R2+R3)		1 mL
Stanadr/Kontrol atau Spesimen	100 mL	100 mL
Mencampur, catat abosorbansi awal pada 405 nm setelah 5 menit, dan Abs/ menit setiap menit selama 3 menit.

Perhitungan Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik

Aktivitas P ACP = Pengujian Aktivitas  1– Pengujian Aktivitas 2.

Contoh, dengan Prosedur manual,

(Panjang jalur 1 cm, 37 ° C, 405 nm):

IU / L = (-Abs / mnt) x 730

kat / L = IU / L 

                 60

Nilai Rujukan Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik

Prostatic Acid Phosphatase (30°C or 37°C)
0 – 0.8 IU/L		0-0.1 μkat/L
Total Acid Phosphatase (37°C)
Men	< 6.6 IU/L	< 0.110 μkat/L
Women	< 6.6 IU/L	< 0.110 μkat/L
Prostatic Acid Phosphatase (37°C)
Men	< 3,5 U/L	< 0,058 μkat/L
Setiap laboratorium harus menetapkan kisaran normalnya sendiri untuk populasi yang dilayaninya.

Limitasi Pemeriksaan Asam Fosfat Metode Kinetik

• Oksalat dan fluorida menghambat aktivitas Asam Fosfatase. 
• Buang semua spesimen ikterik

Referensi

1. TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 711-715.
2. Clinical Guide to Laboratory Test, 4th Ed., N.W. TIETZ (2006) p. 912-915.
3. YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3-498.
4. HILLMANN G. Fortlaufende photometrische Messung der sauren Prostataphosphatase-Aktivität.. –Z. Clin. Chem. u. Klin. Biochem. -1971, vol. 9, p.273-274.
5. VASSAULT A., PHUNG H. T., AUBRY C., GOUDARD M., et les membres de la commission "Enzymologie“ (Maire I., président) de la SFBC (1991)-Recommandations pour la mesure de la concentration catalytique desphosphatases acides dans le sérum humain à 30°C. Inf. Sci. Biol. -1991,vol. 17, n°5, p.327-340.
6. SCHIELE F., ARTHUR Y, FLOC’H A.Y., et SIEST G., Total, tartrate resistant, and tartrate inhibited acid phosphatases in serum: biological variations and reference limits.-Clin. Chem.-1988, vol.34, n°4, p.685-690.
7. SMALL C. W., McNUTT P –Interferences in the direct kinetic determination of acid phosphatatse activity.-Clin. Chem.-1984, vol.30, n°4, p.594-595.
8. Junge W, Thormeyer I, Schlottmann A et al. Determination of Reference Values for Acid Phosphatase using a New Photometric Assay. Pecs, Hungary: 3e Alpe-Adria Congress on Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. September 7-9, 1994

Baca juga : 

• Pemeriksaan Asam Urat Metode Uricase Pada Sampel Serum, Plasma dan Urin
• Pemeriksaan HCV (Virus Hepatitis C) Menggunakan Metode Immunokromatografi
• Antigen Karbohidrat 19-9 (CA19-9)
• Antigen Kanker 125 (CA125)
• Tes Antigen Kanker 15-3 (CA15-3)