Agar Darah Tellurit: Media Unggul untuk Identifikasi Corynebacterium dan Isolasi Agen Penyebab Difteri

Table of Contents

 

INFOLABMED.COM - Agar Darah Tellurit digunakan untuk isolasi dan kultivasi selektif spesies Corynebacterium, bakteri Gram-positif, anaerobik fakultatif, tidak bergerak yang menunjukkan metabolisme fermentatif (karbohidrat menjadi asam laktat) dalam kondisi tertentu. 

Sebagian besar spesies adalah flora normal pada manusia yang ada pada hampir semua situs anatomi. Agar Darah Tellurit adalah media selektif yang digunakan untuk isolasi dan kultivasi spesies Corynebacterium. 

Media ini selektif karena mengandung inhibitor dan diferensial berdasarkan kemampuan organisme untuk mengurangi tellurit kalium.

 Corynebacterium diphtheriae adalah agen penyebab Difteri, dan agen etiologi patogen lain dari genus ini adalah C. pseudotuberculosis (juga dikenal sebagai Corynebacterium ovis), Corynebacterium pyogenes, Corynebacterium aquaticum, C. pseudodiphtheriticum (juga dikenal sebagai Corynebacterium hofmannii), dll.

Prinsip Agar Darah Tellurit

Komponen media, Biopepton, menyediakan senyawa nitrogen sedangkan natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik media.

 Dikalium hidrogen fosfat berfungsi sebagai buffer media. Tepung jagung adalah pengimbang metabolit toksik sementara Hemoglobin dan Suplemen Pertumbuhan Vitamin mempromosikan pertumbuhan yang baik pada spesies Corynebacterium. 

Agar berfungsi sebagai agen pengental. Kalium tellurit bertindak sebagai agen selektif dan menghambat sebagian besar bakteri Gram-positif dan Gram-negatif kecuali spesies Corynebacterium. 

Corynebacterium diphtheriae (agen penyebab difteri) mengurangi kalium tellurit menjadi tellurium dan dengan demikian menghasilkan koloni berwarna abu-abu-hitam.

Komposisi Agar Darah Tellurit

Bahan g/L

• Biopeptone: 10.0
• Natrium klorida: 5.0
• Dikalium hidrogen fosfat: 4.0
• Tepung jagung: 1.0
• Monokalium fosfat: 1.0
• Agar: 10.0
• pH Akhir (pada 25°C): 7.2 ± 0.2

Bahan Tambahan

• Serbuk Hemoglobin
• Satu vial Suplemen Pertumbuhan Vitamin dan Kalium Tellurit 1 %

Persiapan Agar Darah Tellurit

1. Suspensi 31,5 gram media yang telah dikeringkan dalam 500 ml air murni/distilasi.
2. Panaskan hingga mendidih untuk melarutkan media dengan sempurna.
3. Sterilkan dengan otoklaf pada tekanan 15 lbs (121°C) selama 15 menit (siklus yang telah divalidasi).
4. Dinginkan hingga 45-50°C.
5. Secara aseptik tambahkan bahan tambahan yang disediakan oleh pemasok, yaitu larutan serbuk Hemoglobin yang telah disiapkan secara steril (10 g dalam 490 mL air distilasi) dan isi kembali steril dari satu vial Suplemen Pertumbuhan Vitamin dan Kalium Tellurit 1 %.
6. Campur dengan baik sebelum menuangkan ke dalam piring Petri steril.
7. Biarkan mengering.

Penyimpanan dan Masa Simpan Agar Darah Tellurit

• Simpan pada suhu 2-8ºC dan jauh dari cahaya langsung.
• Media tidak boleh digunakan jika ada tanda-tanda kerusakan (mengkerut, retak, atau perubahan warna), kontaminasi.
• Produk ini sensitif terhadap cahaya dan suhu; lindungi dari cahaya, panas berlebihan, kelembaban, dan pembekuan.

Persyaratan Uji Agar Darah Tellurit

Spesimen Uji

• Agar Darah Tellurit
• Loop Inokulasi / Penghisap
• Pembakar Bunsen
• Inkubator
• Isolat Kontrol
• Tempat Sampah

Prosedur Agar Darah Tellurit

• Biarkan piring menghangat pada 37°C atau suhu ruangan, dan permukaan agar mengering sebelum diinokulasi.
• Inokulasi dan streak spesimen secepat mungkin setelah pengumpulan.
• Jika spesimen yang akan dikultur berada pada kapas, gulung kapas di atas area kecil permukaan agar.
• Streak untuk isolasi dengan loop steril.
• Inkubasi piring secara aerobik pada suhu 35-37°C selama 48 jam (atau lebih).
• Periksa karakteristik koloni.

Morfologi Koloni Agar Darah Tellurit

Organisme Pertumbuhan dan Warna Koloni

• Corynebacterium diphtheriae ATCC 11913: Baik Abu-abu-hitam
• Escherichia coli ATCC 25922: Terhambat

Penggunaan Agar Darah Tellurit

• Agar Darah Tellurit adalah media selektif dan diferensial untuk Corynebacterium diphtheriae.
• Ini juga merupakan media selektif untuk kultivasi dan isolasi spesies Corynebacterium.
• Dapat digunakan untuk spesimen klinis dan non-klinis guna memulihkan spesies Corynebacterium.
• Disarankan untuk menggunakan media selektif (Agar Darah Tellurit) dan media non-selektif (Larutan Serum Loeffler) secara paralel saat menginokulasi spesimen yang dicurigai mengandung Corynebacterium diphtheriae untuk hasil yang lebih baik.

Batasan Agar Darah Tellurit

• Karakteristik koloni hanya memberikan identifikasi presumsi, sehingga tes biokimia, imunologi, molekuler, atau spektrometri massa harus dilakukan pada koloni dari kultur murni untuk identifikasi akhir.
• Inokulasi serial mungkin diperlukan untuk memastikan isolasi yang memadai dari sampel flora campuran.

Catatan tentang Agar Darah Tellurit

• Swab tenggorokan atau hidung secara langsung diinokulasi dan di-streak pada media agar ini.
• Modifikasi media Neill lebih disukai untuk isolasi dan diferensiasi tipe Corynebacterium diphtheriae.
• C. diphtheriae, juga disebut sebagai bacillus Klebs-Loeffler, adalah anaerob fakultatif, Gram-positif, tidak berspora, dan tidak berkapsul.
• Difteri adalah penyakit menular yang disebabkan oleh agen etiologi, C. diphtheriae, dan ditandai oleh lesi inflamasi dan eksudat membran pada mukosa saluran pernapasan atas.
• Larutan Serum Loeffler mengembalikan virulensi dan sifat identifikasi lainnya (mikroskopis dan kolonial) setelah hilang akibat inkubasi yang berkepanjangan atau subkultur berulang, dan juga digunakan untuk demonstrasi pigmen dan askospora.
• Agar darah tellurit darah Downie (BTA), medium Hoyle (modifikasi medium Neill), Tinsdale, dan Loeffler's serum slope adalah media yang paling umum digunakan untuk isolasi kultur dan diferensiasi Corynebacterium diphtheriae.