Prosedur Pewarnaan Endospora, Prinsip, dan Hasilnya

Table of Contents

 

Foto : Paramedics World

INFOLABMED.COM - Pewarnaan endospora merupakan teknik penting dalam bakteriologi yang mengidentifikasi endospora dalam sampel bakteri. 

Endospora adalah struktur khusus yang dibentuk oleh beberapa bakteri sebagai respons terhadap kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan. 

Struktur ini berfungsi sebagai mekanisme perlindungan, memungkinkan bakteri bertahan dalam kondisi yang seharusnya fatal. 

Endospora terbentuk di dalam sel bakteri dan sangat tahan terhadap panas, bahan kimia, dan faktor lingkungan lainnya.

Sinyal lingkungan, seperti penipisan nutrisi atau paparan suhu ekstrem, memicu pembentukan endospora. 

Sel bakteri mengalami perubahan morfologis selama sporulasi, membentuk endospora yang sangat tahan. 

Setelah terbentuk, endospora dapat tetap dormant sampai kondisi menjadi menguntungkan untuk perkecambahan.

Karena tahan terhadap faktor lingkungan, endospora sulit untuk diwarnai menggunakan metode konvensional. 

Ilmuwan mengembangkan teknik khusus untuk menghasilkan warna pada struktur ini, memungkinkan identifikasi dalam sampel bakteri.

Prinsip Pewarnaan Endospora

Pewarnaan endospora adalah pewarnaan diferensial yang digunakan untuk mendeteksi, mengidentifikasi, dan membedakan antara endospora dan sel vegetatif, yang merupakan endospora yang belum berkembang. Tujuan utama dari teknik ini adalah untuk menentukan apakah endospora ada atau tidak.

Beberapa prosedur telah dimodifikasi untuk meningkatkan efektivitas pewarnaan dengan meningkatkan konsentrasi zat warna yang digunakan, memperpanjang waktu pemanasan, atau menerapkan radiasi ultraviolet. 

Dengan kemajuan teknologi mikroskop, beberapa peneliti sekarang menggunakan mikroskopi fase kontras untuk menghasilkan gambar detail dari endospora bakteri dengan cepat.

Pewarna yang digunakan dalam pewarnaan endospora terdiri dari:

• Pewarna primer: pewarna primer dalam pewarnaan endospora digunakan untuk memilih endospora dan membuatnya dapat dibedakan dari bagian vegetatif sel.
• Penghilang warna: penghilang warna menghapus pewarna primer dari sel vegetatif, membuatnya tidak berwarna.
• Pewarna kontras: pewarna kontras mewarnai sel vegetatif yang telah dihilangkan pewarna primer.

Prosedur Pewarnaan Endospora

Ada berbagai metode/teknik pewarnaan endospora, masing-masing dengan prosedur uniknya. Namun, berikut adalah prosedur umum:

1. Persiapkan saputangan organisme pada slide bersih dan bebas lemak.
2. Keringkan udara dan panaskan saputangan.
3. Tutupi saputangan dengan pewarna primer.
4. Panaskan pewarna hampir mendidih dan biarkan lembab selama beberapa menit untuk memungkinkan penetrasi ke endospora.
5. Bilas slide dengan air untuk menghapus pewarna primer dari sel vegetatif.
6. Terapkan pewarna kontras untuk mewarnai sel vegetatif.
7. Perhatikan slide di bawah mikroskop. Endospora akan berwarna berbeda dari sel vegetatif.
8. Acu referensi pada teknik individu untuk prosedur yang tepat.

Metode Pewarnaan Endospora

Ada berbagai metode/teknik pewarnaan endospora, masing-masing dengan kelebihan dan kekurangannya. Ini termasuk:

Metode	Pewarna Primer	Penghilang Warna	Pewarna Kontras	Pewarnaan
Metode Pewarnaan Schaeffer-Fulton	Malachite Green	Air	Safranin	Endospora tampak hijau, sel vegetatif tampak merah muda/merah
Metode Dorner	Carbol Fuschin	Asam-alkohol	Nigrosin	Endospora berwarna merah, Bakteri tidak berwarna, Latar belakang Hitam
Metode Zeihl-Nelson yang Dimodifikasi	Carbol Fuschin	0.25-0.5% asam sulfat	Loeffler's methylene blue	Endospora tampak merah, dan bakteri tampak biru
Metode Bartholomew dan Mittwer	Malachite Green	Air	Safranin	Endospora tampak hijau, sel vegetatif tampak merah muda/merah
Metode Abbott	Methylene Blue	Asam alkohol	Anilin fuschin	Endospora tampak biru, bakteri berwarna merah
Metode Moeller	Carbol fuschin	Etanol asam	Methylene biru	Endospora tampak merah, bakteri berwarna biru
Metode Moeller yang Dimodifikasi	Carbol fuschin	2% asam sulfat & 80% etanol	Loeffler methylene biru	Endospora tampak merah, bakteri berwarna biru
Metode Stain Schaeffer-Fulton	Malachite Green	Air	Safranin	Endospora tampak hijau, sel vegetatif tampak merah muda/merah

Teknik Pewarnaan Schaeffer-Fulton

Pewarnaan Schaeffer-Fulton, yang pertama kali diperkenalkan oleh Alice B. Schaeffer dan MacDonald Fulton pada tahun 1930-an, adalah metode yang umum digunakan untuk pewarnaan endospora. 

Teknik ini menggunakan malachite green sebagai pewarna primer untuk mewarnai endospora menjadi hijau, sedangkan safranin digunakan sebagai pewarna kontras untuk mewarnai struktur bakteri lainnya menjadi merah.

Saputangan bakteri disiapkan pada slide dan difiksasi panas untuk melakukan pewarnaan Schaeffer-Fulton. 

Slide kemudian ditutupi dengan larutan malachite green dan dipanaskan untuk memfasilitasi penetrasi pewarna ke dalam endospora. 

Setelah mendingin, slide dibilas dengan air untuk menghapus pewarna berlebih dari sel vegetatif, meninggalkan hanya endospora yang berwarn

a hijau. Slide kemudian diwarnai kontras dengan safranin untuk mewarnai sel vegetatif menjadi merah atau merah muda. 

Endospora terlihat di bawah mikroskop sebagai struktur hijau, sedangkan sel vegetatif tampak merah atau merah muda.

Kelebihan dan Kekurangan Pewarnaan Schaeffer-Fulton

Kelebihan:

• Cepat dan mudah dilakukan.
• Memberikan kontras yang baik antara endospora dan sel vegetatif.
• Metode ini adalah teknik yang paling banyak digunakan untuk pewarnaan endospora.

Kekurangan:

• Mungkin terlalu panas dan merusak sel dan endospora.
• Mungkin menghilangkan warna dari endospora jika tidak dibilas dengan baik.
• Memerlukan penggunaan uap panas, yang dapat menimbulkan bahaya keselamatan.

Aplikasi Pewarnaan Endospora

• Untuk menemukan dan mengidentifikasi bakteri pembentuk endospora dalam sampel klinis, seperti yang menyebabkan antraks, tetanus, botulisme, dan keracunan makanan.
• Untuk membedakan antara bakteri pembentuk spora dan non-pembentuk spora dalam sampel lingkungan, seperti tanah dan air.
• Untuk mengevaluasi efisiensi metode sterilisasi dan mencegah kontaminasi makanan dan perangkat medis oleh endospora.
• Untuk menyelidiki struktur dan komposisi endospora serta perannya dalam kelangsungan hidup bakteri dan patogenesis.

Pewarnaan endospora adalah teknik penting dalam bakteriologi yang mengidentifikasi dan membedakan bakteri pembentuk endospora dari bakteri lainnya. 

Endospora adalah struktur yang sangat tahan yang beberapa bakteri hasilkan untuk bertahan dalam kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan.

 Endospora sulit diwarnai menggunakan metode konvensional dan memerlukan teknik khusus yang menggunakan malachite green sebagai pewarna primer dan safranin sebagai pewarna kontras.

Teknik-teknik ini memiliki berbagai aplikasi dalam mikrobiologi klinis, lingkungan, dan industri serta dalam studi struktur dan fungsi endospora.

Terima kasih telah membaca artikel ini tentang prosedur, prinsip, dan hasil pewarnaan endospora. Semoga artikel ini bermanfaat untuk memahami teknik penting dalam dunia bakteriologi.***