Teknik Pewarnaan Kapsul Bakteri - Pengantar, Metode, Prinsip, Prosedur & Hasil

Table of Contents

 

Foto : paramedicsworld.com

INFOLABMED.COM - Kapsul pada bakteri merupakan hasil dari sekresi viskus amorf yang dilepaskan oleh bakteri.

Ketika sekresi ini tetap longgar dan tidak terdemarkasi, disebut sebagai lapisan lendir dan ketika diorganisir menjadi struktur yang tajam, disebut sebagai Kapsul.

Sebagian besar kapsul terdiri dari polisakarida tetapi ada banyak yang terdiri dari Polipeptida (Protein). 

Kapsul biasanya rapuh dan dapat dengan mudah hancur atau terdistorsi oleh pemanasan sehingga pewarnaan kapsul dirancang sedemikian rupa sehingga menjaga morfologi keseluruhan bakteri serta mempertahankan struktur Kapsul agar dapat dengan mudah diidentifikasi.

Selain itu, untuk mendapatkan hasil yang lebih baik dan meningkatkan ukuran kapsul bakteri, tetes serum dapat digunakan saat menyiapkan sentuhan yang membuatnya lebih nyaman untuk mengamati kapsul bakteri dengan mikroskop komposit / cahaya yang khas.

Tidak ada penggunaan proses kompleks dan banyak pereaksi atau pewarna yang kuat dalam proses pewarnaan Kapsul dan metode yang paling sederhana seperti metode tinta India memberikan hasil yang memuaskan sehingga kita dapat dengan mudah menentukan kehadiran atau ketiadaan kapsul dalam sel bakteri.

Pemanasan juga dihindari karena akan menghancurkan atau merusak kapsul yang membuatnya lebih nyaman dan selain itu pemula dalam mikrobiologi dapat dengan mudah melakukannya dan menjelajahi lebih lanjut dalam dunia mikroba.

Secara singkat, dalam teknik pewarnaan Kapsul, latar belakang dan badan sel bakteri diwarnai sedangkan kapsul tetap tidak berwarna. Namun, hasilnya bervariasi sesuai dengan metodologi yang digunakan untuk pewarnaan kapsul.

Prinsip Pewarnaan Kapsul Bakteri

Pertama-tama, mari kita bahas struktur sel bakteri yang terlibat dalam teknik pewarnaan ini dan kemudian kita akan beralih ke prinsip-prinsip yang terlibat dalam teknik pewarnaan kapsul.

Bakteri yang terkapsulasi mendapatkan kapsul di sekitar tubuhnya yang muncul sebagai halo yang jelas.

 Kapsul bakteri bersifat non-ionik, sehingga tidak ada atau sangat kecil kemungkinan bahwa pewarna asam atau basa akan menempel pada permukaannya sehingga tetap tidak berwarna.

Cara yang sangat baik untuk mendemonstrasikan kapsul adalah dengan mewarnai badan sel bakteri dan latar belakang sementara kapsul bakteri tetap tidak berwarna.

Badan sel bakteri diwarnai paling baik dengan pewarna Basa seperti Crystal violet, Safranin, Methylene blue dll. sedangkan latar belakang diwarnai paling baik dengan pewarna Asam yang meliputi tinta India, Nigrosin, Eosin, Congo red dll.

Ada banyak metode yang tersedia untuk mendemonstrasikan kapsul dalam sel bakteri. Hasil pewarnaan bervariasi sesuai dengan Metode yang diikuti tetapi umumnya semua metode memiliki satu kesamaan bahwa itu mewarnai sel bakteri, kapsul, dan/atau latar belakang.

Pewarnaan Kapsul Bakteri Metode Tinta India / Metode Nigrosin

Ini adalah metode pewarnaan kapsul yang paling mudah. Dalam teknik ini, dua pewarna digunakan yaitu Crystal violet dan tinta India / Nigrosin.

Kapsul sel bakteri muncul sebagai halo jelas di sekitar badan sel bakteri yang diwarnai dan latar belakang gelap (warna tergantung pada pewarna yang digunakan - tinta India atau Nigrosin).

Pewarnaan Kapsul Bakteri Metode Pewarnaan Anthony

Ini adalah metode pewarnaan kapsul yang paling umum digunakan lainnya. Dalam teknik ini, pewarna crystal violet digunakan sebagai pewarna utama.

Selain itu, larutan 20% tembaga sulfat digunakan yang memainkan peran penting dalam prosedur pewarnaan dengan bertindak sebagai agen penghilang warna serta Pewarna Kontras.

20% CuSO4 menghilangkan kapsul bakteri dengan menghapus Crystal violet yang menempel padanya tetapi tidak memiliki efek seperti itu pada badan sel bakteri dan juga mewarnai kapsul yang kemudian muncul sebagai zona atau halo berwarna biru pudar di sekitar badan sel bakteri ungu.

Hal penting yang perlu dicatat di sini adalah bahwa tidak ada mordant dan tidak ada penghilang warna yang kuat digunakan.

Bahan yang Dibutuhkan untuk Metode Pewarnaan Kapsul

• Laminasi kaca mikroskopis.
• Loop inokulasi.
• Lampu Spirit.
• Rak pewarna.
• Botol cuci.
• Mikroskop (dengan lensa objektif 100X).
• Untuk metode tinta India / Nigrosin

Tinta India / Nigrosin (larutan 10%) Crystal violet (larutan 1%)

• Untuk metode Anthony

Crystal violet (larutan 1%) Tembaga Sulfat (Larutan 20%) Prosedur Teknik Pewarnaan Kapsul

Prosedur pewarnaan kapsul menggunakan metode tinta India / Nigrosin

1. Ambil Laminasi kaca mikroskopis yang bersih, Kering, Bebas Goresan, dan Bebas Lemak dan letakkan tetes tinta India atau Nigrosin di satu ujung dekat tepi.
2. Ambil sebagian kecil koloni bakteri atau satu loop cairan kaldu dengan bantuan loop inokulasi steril.
3. Campur dengan baik kultur dengan pewarna yang diambil di atas Laminasi kaca.
4. Sekarang, ambil Laminasi Kaca Mikroskopis lainnya, letakkan dekat dengan campuran specimen-pewarna pada sudut sekitar 30° - 45°.
5. Geser lapisan ke arah tetes campuran specimen sampai kontak terjadi dengan tetes pada sudut tertentu. Kemudian, geser lapisan penyebarkan dengan halus dan cepat maju ke depan di atas lapisan spesimen, menarik campuran pewarna di belakangnya menjadi film tipis.
6. Biarkan sapuan kering di udara.

CATATAN: Jangan Pemanasan karena panas akan melelehkan kapsul dan merusak bentuk sebenarnya dari sel bakteri.

7. Sekarang, banjiri lapisan dengan larutan crystal violet selama 1 menit dan bilas dengan hati-hati dan lembut dengan air.

CATATAN: Berhati-hatilah saat melakukan langkah ini karena air dapat menghapus kapsul dari sel serta dapat mencuci sapuan.

8. Biarkan sapuan mengering di udara.

CATATAN: Jangan Menyerap kering lapisan karena dapat merusak kapsul serta sapuan.

⇒ Amati di bawah mikroskop pada objektif daya tinggi (45X) dan minyak perendaman (100X). Untuk memvisualisasikan kapsul dengan mudah, pastikan untuk mengurangi jumlah cahaya saat mengamati di bawah mikroskop.

Prosedur pewarnaan kapsul menggunakan metode pewarnaan Anthony

Prosedur metode pewarnaan Anthony cukup mirip dengan metode tinta India / Nigrosin pada awalnya yang sebagai berikut:

1. Ambil Laminasi kaca mikroskopis yang bersih, Kering, Bebas Goresan, dan Bebas Lemak dan letakkan tetes crystal violet di satu ujung dekat tepi.
2. Ambil sebagian kecil koloni bakteri atau satu loop cairan kaldu dengan bantuan loop inokulasi steril.
3. Campur dengan baik kultur dengan pewarna yang diambil di atas Laminasi kaca.
4. Sekarang, ambil Laminasi Kaca Mikroskopis lainnya, letakkan dekat dengan campuran specimen-pewarna pada sudut sekitar 30° - 45°.
5. Geser lapisan ke arah tetes campuran specimen sampai kontak terjadi dengan tetes pada sudut tertentu. Kemudian, geser lapisan penyebarkan dengan halus dan cepat maju ke depan di atas lapisan spesimen, menarik campuran pewarna di belakangnya menjadi film tipis.
6. Biarkan sapuan kering di udara.

CATATAN: Jangan Pemanasan karena panas akan melelehkan kapsul dan merusak bentuk sebenarnya dari sel bakteri.

7. Sekarang, miringkan sapuan dan bilas dengan larutan tembaga sulfat 20%.

CATATAN: Jangan Menyerap kering lapisan karena dapat merusak kapsul serta sapuan.

8. Amati di bawah mikroskop pada objektif daya tinggi (45X) dan minyak perendaman (100X). Untuk memvisualisasikan kapsul dengan mudah, pastikan untuk mengurangi jumlah cahaya saat mengamati di bawah mikroskop.

Pengamatan & Hasil Pewarnaan Kapsul

Hasil Pewarnaan Kapsul menggunakan Metode Tinta India / Nigrosin

Foto : paramedicsworld.com

Kapsul muncul sebagai halo jelas atau zona jelas di sekitar badan sel bakteri berwarna ungu pada latar belakang gelap. Warna latar belakang disebabkan oleh tinta India atau Nigrosin yang digunakan.

Hasil Pewarnaan Kapsul menggunakan Metode Anthony

Foto : paramedicsworld.com

Kapsul muncul sebagai halo biru pudar di sekitar badan sel bakteri ungu pada latar belakang transparan karena tidak ada pewarna latar belakang yang digunakan dalam teknik ini.

HAL-HAL YANG PERLU DIINGAT…

Dengan menggunakan teknik tinta India / Nigrosin, kita mewarnai latar belakang dan badan sel bakteri, bukan kapsul bakteri sebenarnya.

Dengan metode pewarnaan Anthony, kita mewarnai badan sel bakteri serta kapsul tetapi bukan latar belakang.***